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酶聯(lián)免疫檢測(cè)的介紹
酶聯(lián)免疫
檢測(cè)(ELISA)是常見(jiàn)的抗體或抗原測(cè)定方法。ELISA是基于相關(guān)聯(lián)的酶對(duì)那些免疫復(fù)合物發(fā)生酶催化反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定的??贵w可以固定在一個(gè)有表面涂層的塑料板上,因此經(jīng)簡(jiǎn)單洗滌這塊塑料板,免疫復(fù)合物就易于與其他組分分開(kāi),而進(jìn)行測(cè)定。
酶聯(lián)免疫檢測(cè)法(PSTVd除外)全過(guò)程包括病毒抗原的分離與純化、病毒抗血清的制備和抗血清反應(yīng)3個(gè)環(huán)節(jié)??寡宸磻?yīng)實(shí)驗(yàn)步驟包括:抗原吸附在固相載體上,加待測(cè)抗體,再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體,生成抗原一待測(cè)抗體一酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物,再與該酶的底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計(jì)的光吸收計(jì)算抗體的量。待測(cè)抗體的量與有色產(chǎn)物成正比。同理也可包被抗體,測(cè)定抗原含量。ELISA常用的有直接法測(cè)定抗原、競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定抗原、雙抗體夾心法測(cè)定抗原等方法。
雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法是將抗體吸附于固相表面,加抗原,形成抗原一抗體復(fù)合物,再加酶標(biāo)抗體,*后加底物,根據(jù)底物的降解量確定抗原有無(wú)及數(shù)量。
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